МБОУ «Школа № 86» Советского района г. Казани
МБУДО «Центр детского творчества «Танкодром»

Проточно-инжекционный анализ содержания тетрациклина в сточной воде фармацевтического производства

Джахангиров  Миркялам Джахангир Оглы, 
10 класс МБОУ "Школа № 86" 

Советского района г. Казани
Научный руководитель: к.х.н., п. д. о
Гедмина Анна Владимировна

                                                               Казань, 2019 год

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ									   3

1. Литературный обзор									             6
1.1. Тетрациклины. Общая характеристика      						   6
1.2. Побочное воздействие антибиотиков тетрациклинового ряда на организм человека										                        8
1.3. Методы определения тетрациклина в различных объектах                             9
2. Экспериментальная часть	            						            11
2.1 Оборудование, используемое для проведения исследования                         11
2.2 Объекты исследования и приготовление растворов                                        12
3. Обсуждение полученных результатов					                      14
4. Статистическая обработка полученных результатов 		            18
ВЫВОДЫ											            20
	СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ					            21

ВВЕДЕНИЕ
Российский рынок производства готовых лекарственных средств является седьмым в общемировом объеме [1], и на данный момент считается одним из самых перспективных, уступая в темпах роста производства только Бразилии и Китаю [2], причем 55% от всей фармацевтической продукции производится отечественными производителями. До 100% антибиотиков широкого спектра действия (способность бороться сразу с несколькими раздражителями, оказывающих негативное влияние на здоровье человека), например, антибиотиков тетрациклинового ряда, сегодня производится в Российской Федерации. Поэтому в связи с интенсивностью развития фармацевтической промышленности и увеличением объемов производства лекарственных средств анализ сточных вод фармацевтического производства и контроль за эффективностью работы очистных сооружений приобретает особую актуальность.
Не достаточно эффективная работа очистных сооружений может привести к попаданию компонентов сточных вод фармацевтического производства в естественную среду, и как следствие быть поглощенным живыми организмами. Таким путем оно включается в трофические сети экосистем, участвует в круговороте веществ, оказывая вредное воздействие на живые организмы, в том числе в организм человека.
Попадая в организм человека тетрациклин и его производные (доксициклин, окситетрациклин), имеют свойство накапливаться и негативно сказываться на здоровье человека, приводя к повышению внутричерепного давления, головокружению, гемолитической анемии, снижению аппетита, тошноте, рвоте, диарее, гастриту, изъязвлению желудка и двенадцатиперстной кишки, гепатотоксическому действию, панкреатиту, дисбактериозу, повышению антибиотикорезистентности. Последнее из перечисленных негативных воздействий  приводит к невозможности использования для лечения заболеваний человека тетрациклинговых антибиотиков, к которым у бактерий вырабатывается устойчивость, терапия с помощью таких лекарственных средств не будет являться эффективной, что представляет огромную угрозу здоровью человека.
К числу методов, нашедших широкое применение для определения тетрациклина и его производных в сточных и природных водах, следует отнести хроматографические методы и различные варианты иммунохимических методов. Эти методы характеризуется высокой чувствительностью, но и высокой дороговизной и длительностью анализа. Тест-методы являются более дешевыми, но полуколичественными, и точное содержание тетрациклина в исследуемом объекте, используя тест-полоски определить весьма затруднительно. 
В качестве гипотезы предполагается: наличие тетрациклина в образце химического стока коллектора промывных вод оборудования фармацевтического производства тетрациклина. Высокое содержание тетрациклина может привести к экологическому риску изменения привычного состава поверхностных вод, и как следствие к нарушению баланса экосистемы водоема, что приведет к некоторым неблагоприятным процессам, оказывающим отрицательное влияние на темпы роста и жизни гидробионтов. Обоснованность выбранной темы исследования продиктована ее актуальностью, степенью ее важности и востребованностью для решения проблемы, поставленной перед автором работы, и для снижения уровня экологического риска. Актуальность качественного и количественного анализа производственных сточных вод важна для выбора метода их очистки, контроля за эффективностью работы очистных сооружений и за качественным составом сбрасываемых сточных вод, а также для решения вопросов о возможности повторного использования стоков, извлечения и утилизации веществ, загрязняющих воду. В связи с этим анализ промывных вод на содержание конечного продукта фармпроизводства тетрациклина является важным и востребованным исследованием, поскольку является индикатором уровня экологического риска. 
Целью исследования является разработка условий проведения проточно-инжекционного анализа (ПИА) на содержание тетрациклина в образцах химического стока коллектора промывных вод оборудования  фармацевтического производства исследуемого антибиотика.
В связи с этим были поставлены следующие задачи:
•	Разработать способ амперометрического детектирования тетрациклина в условиях проточно-инжекционного анализа на графитовом электроде с осадком золота;
•	∙Выявить оптимальные электрохимические и гидродинамические условия регистрации ПИА-сигнала с наилучшими характеристиками;
•	∙Оценить эксплуатационные характеристики разработанного метода (производительность, воспроизводимость анализа) и правильность разработанного способа амперометрического детектирования в проточных условиях методики методом "введено - найдено;
•	∙Определить содержание тетрациклина в анализируемой пробе промывных вод с использованием проточно-инжекционного анализа; 
Таким образом, объектом исследования являлась проба промывных вод  оборудования, используемого в производстве тетрациклина. В качестве метода измерения содержания тетрациклина в пробе использовали проточно-инжекционный анализ с амперометрическим детектированием, расчет проводили методом градуировочного графика, а оценку правильности разработанной методики – методом «введено-найдено».

1. Литературный обзор
1.1. Тетрациклины. Общая характеристика.

К антибиотикам, обладающих широким спектром действия, относят тетрациклин и его производные, которые эффективно применяются для лечения перечисленных заболеваний человека. Кроме того, эти препараты нашли широкое применение в лечении и профилактике заболеваний животных, а также для улучшения качества и сохранности кормов. Антибиотики достаточно долго сохраняются в продуктах животноводства, сточных и природных водах и могут попадать в организм человека, вызывая при этом аллергические реакции, подавляют активность ферментов, изменяют микрофлору организма. В связи с ростом интенсивности использования тетрациклиновых антибиотиков, создание и внедрение более совершенных и экспрессных методов контроля состава и качества лекарственных препаратов на их основе, является актуальной задачей.
Химические формулы основные представители антибиотиков тетрациклинового ряда, используемые в настоящее время придставлены на рис. 1. Их определяют в лекарственных средствах, пищевых продуктах, биомедицинских, природных и промышленных объектах. Недостатком этих лекарственных средств является перекрестная устойчивость к препаратам этой группы антибиотиков.

Рисунок 1 - Структурная формула тетрациклина
В целом тетрациклины являются антибиотиками второго ряда, они используются только в случае наличия устойчивости микроорганизмов к другим группам антибактериальных лекарственных препаратов или тяжелого течения специфических инфекций. В комбинации с противопротозойными средствами тетрациклины используются для лечения балантидиаза. 
На сегодняшний день эта группа антибиотиков на фармакологическом рынке представлена двумя основными представителями, к которым относятся:
•	Тетрациклин – чаще используется при инфекционных поражениях кожи и глаз в качестве препарата второго ряда.
•	Доксициклин – основной антибиотик, который используется для этиологической терапии специфических инфекций урогенитального тракта и опасных тяжелых инфекций. Этот антибиотик является химически модифицированным производным тетрациклина, он лучше усваивается из кишечника (выше биодоступность) и оказывает меньшее негативное влияние на организм.
1.2. Побочное воздействие антибиотиков тетрациклинового ряда на организм человека

Применение антибиотиков этой группы противопоказано при ряде состояний организма человека, как патологических, так и физиологических, к ним относятся:
•	Индивидуальная непереносимость или аллергические реакции.
•	Детский возраст до 8 лет.
•	Беременность (причем на любом сроке ее течения) и грудное вскармливание.
•	Патология печени или почек, которая сопровождается их функциональной недостаточностью.
Тетрациклины обладают определенной токсичностью для организма человека, они могут приводить к развитию тяжелой аллергии, вплоть до анафилактического шока (критическая артериальная гипотензия и развитие недостаточности практически всех органов), повышению внутричерепного давления, головокружению, гемолитической анемии, снижению аппетита, тошноте, рвоте, диарее, гастриту, изъязвлению желудка и двенадцатиперстной кишки, гепатотоксическому действию, панкреатиту, дисбактериозу, повышению антибиотикорезистенстности.
Большой проблемой для здоровья всего человечества является повышение устойчивости к антибиотикам у бактерий, которые являются возбудителями различных заболеваний человека. 
Устойчивость к антибиотикам (антибиотикорезистентность) - это сохранение способности бактерий к размножению в присутствии концентраций антибиотиков, создаваемых при введении терапевтических доз лекарственных препаратов. Различают антибиотикорезистентность нескольких видов:   
•	Природная, которая определяется свойствами конкретного вида или рода микроорганизмов;
•	Приобретённая, которая возникает в результате потери чувствительности бактерий к антибиотику из - за генетических мутаций. 
Устойчивость к антибиотикам не позволяет применять конкретные лекарственные средства для лечения заболеваний человека ввиду нечувствительности бактерий - возбудителей этих самых заболеваний. Антибиотикорезистентность у микроорганизмов может развиться в результате:
•	Мутаций в геноме;
•	Изменения проницаемости мембраны антибиотика;
•	Изменения "мишени" - конкретной структуры клетки, на который антибиотик должен оказывать воздействие;
•	Нарушения специфического транспорта антибиотика в бактериальную клетку (именно этот биологический механизм является причиной возникновения устойчивости конкретно к тетрациклину);
•	Превращения активной формы антибиотика в неактивную при помощи ферментов.
Использование тетрациклина для профилактики и лечения заболеваний коров в неконтролируемых дозировках ведет к распространению антибиотикорезистентности. Попадая в организм животного, антибиотик накапливается, и в результате действия определенных биохимических механизмов мы получаем бактерии - возбудители, абсолютно нечувствительные к тетрациклину. С экскрементами коров эти микроорганизмы попадают в окружающую среду, а с молоком - и в организм человека, что представляет огромную угрозу для его здоровья, поскольку возникает проблема невозможности применения тетрациклина для лечения определённых заболеваний.
 1.3. Методы определения тетрациклина в различных объектах
К числу методов, нашедших широкое применение для определения тетрациклинов, следует отнести различные варианты хроматографических и иммунохимических методов [3]. Существенно меньше работ посвящено определению тетрациклинов колориметрическими и спектроскопическими. Особое внимание уделяется электрохимическими методами, определение тетрациклинов, используя различные варианты вольтамперометрии возможно вследствие их легкой окисляемости на различных электродах. Вольтамперометрические способы могут быть использованы для определения тетрациклина и его производных в различных объектах (рис. 2). 

Рисунок 2 – Объекты вольтамперометрического анализа, содержащие тетрациклин  
В работе [4] описан вольтамперометрический способ определения тетрациклина в сточных водах, который основан на использовании стеклоуглеродного электрода (СУ), модифицированном композитом на основе l-цистеина и восстановленного в процессе иммобилизации оксида графена (l-Cys-GOred). Схема модификации электрода и окисления тетрациклина на нем представлена на рис. 3. Аналитический сигнал окисления тетрациклина на этом электроде проводили в дифференциально-импульсном режиме. Линейная зависимость тока пика окисления тетрациклина от его концентрации находится в диапазоне от 8.0 × 10−6 до 1.4 × 10−4 M, с пределом обнаружения равном 1.2 × 10-7 M.

Рисунок 3 – Схема процесса модификации электрода и окисления тетрациклина на l-Cys-GOred-СУ

Несмотря на невысокую стоимость вольтамперометрического анализа по сравнению с хроматографией и иммуно-ферментным, не всегда удается продемонстрировать высокую селективность, поэтому поиск высокочувствительного, селективного и экспрессного способа (что является очень важным для анализа в промышленных масштабах) определения тетрациклина является важной задачей.

2. Экспериментальная часть
Как следует из литературного обзора, продолжается поиск вольтамперомерических методов определения содержания антибиотика-тетрациклина в сточных и природных водах. 
Этапы работы:
•	Определение возможности проявления электрокаталитической активности осадка золота при окислении тетрациклина;
•	Установление оптимальных условий получения осадка золота на поверхности электрода из СУ (времени осаждения золота) с целью регистрации максимального электрокаталитического тока окисления тетрациклина; 
•	Выбор оптимальных условий амперометрического детектирования в проточно-инжекционных условиях тетрациклина: определение гидродинамических и электрохимических параметров проточной системы с использованием СУ электрода  с осадком золота, оценка производительности проточно-инжекционного анализа; 
•	Разработка селективного способа амперометрического детектирования тетрациклина в условиях проточно-инжекционного анализа, установление линейной зависимости ПИА-сигнала от концентрации тетрациклина;
•	Определение содержания тетрациклина в мг/л в образцах химического стока коллектора промывных вод оборудования  для производства антибиотика и соотношение полученного значения с предельно-допустимое значение для сточных вод фармацевтического производства.
•	проведение статистической обработки, оценка правильности используемой методики методом «введено-найдено».
2.1 Оборудование, используемое для проведения исследования
Для получения сенсорной части модифицированного электрода, и в качестве детектора амперометрического детектирования в проточно-инжекционных условиях использовали прибор «Экотест-ВА» фирмы «Эконикс-Эксперт» (рис.4).

Схема оборудования:
1-Прибор «Экотест-ВА»
2- Магнитная мешалка
3-Электрохимическая ячейка:
*	Стеклоуглеродный электрод (СУ) с осадком Со
*	Платиновый контакт - противоэлектрод
*	Хлоридсеребряный электрод

Рисунок 4 – Схема оборудования для вольтамперометрических исследований.

Для получения осадка золота на поверхности электрода из СУ использовали потенциостатический электролиз из раствора, содержащего 1мМ HAuCl4 в 0.01М растворе H2SO4. 

1 - перистальтический насос 
2 - инжектор 
3 – смеситель
4 - электрохимическая ячейка 
5 и 6 – вольтамперометрический анализатор и компьютер.

Проведение амперометрического детектирования в проточно-инжекционных условиях осуществляли с помощью проточной системы, схема которой представлена на рис.5.

Рисунок 5 – Схема проточно-инжекционной системы

2.2 Объекты исследования и приготовление растворов
Объектом исследования является образец химического стока коллектора промывных вод оборудования для производства антибиотика АО «Татхимфармпрепараты». Предметом исследования был образец химического стока коллектора промывных вод аппаратного комплекса, используемого для синтеза тетрациклина, на предмет оценки его содержания в пробе с использованием амперометрического детектирования в условиях проточно-инжекционного анализа. 
Для построения градуировочной зависимости стандартные концентрации тетрациклина получали последовательным разбавлением 0.005М раствора тетрациклина  0.01 М растворе H2SO4 с рН 2. В качестве потока-носителя проточной системы использовали 0.01 М растворе H2SO4. 
Структурная формула исследуемого соединения представлены в таблице 1.
Таблица 1 – Структурная формула предмета исследования 

Название
органического соединения	Структурная формула
органического соединения	
Тетрациклин

	

3. Обсуждение полученных результатов
Изучено электрохимическое поведение тетрациклина на немодифицированном СУ (рис.5а) электроде и на модифицированном СУ электроде осадком золота (Au-СУ) (рис.5б). Концентрация тетрациклина в исследуемом растворе составляет 0.5мМ. Как видно из рис.5а, тетрациклин окисляется на немодифицированном СУ, однако его определение на таком электроде не является чувствительным, поскольку значение тока окисления тетрациклина невелико. 

	(б) 	
Рисунок 6 - Циклические вольтамперограммы, полученные на СУ (а) и Au-СУ (б) в присутствии (кривая 2) и отсутствии тетрациклина (кривая 1).

Использование вольтамперометрии с электрокаталитическим откликом позволяет значительно повысить величину тока окисления аналита [5,6]. В качестве катализатора-модификатора для окисления тетрациклина использовали осадок золота. Как видно из рис.5б, кривая 2, величина тока окисления золота многократно увеличивается в присутствии тетрациклина. Регистрируемый ток окисления тетрациклина на электроде Au-СУ зависит от времени осаждения модификатора-золота. На диаграмме (рис.7) приведена зависимость величины тока окисления тетрациклина от времени осаждения металла, так наибольшее значение тока фиксируется при времени осаждения золота равном 60 секунд. 

Рисунок 7 - Зависимость величины тока окисления тетрациклина от времени электроосаждения золота

Регистрируемый в присутствии тетрациклина каталитический отклик был использован для его детектирования в условиях проточно-инжекционного анализа, который позволяет автоматизировать процесс, увеличить его производительность и экспрессность, что является необходимым для анализа сточных вод в промышленном масштабе. 
Как видно из приведенной и многократно повторенной проточно-инжекционной амперограммы показана высокая воспроизводимость величины ПИА-сигнала при многократном вводе инжекции при этом  производительность проводимого анализа составляет 60 проб в час (рис.8).

Рисунок 8 – Производительности ПИА-анализа тетрациклина

На величину аналитического сигнала в условиях потока влияют гидродинамические параметры проточной системы, а именно скорость потока-носителя (рис.9а) и объема инжектируемой в поток пробы (рис. 9б), а также электрохимические параметры – потенциал регистрации (рис.10).

	
	
Рисунок 9 – Зависимость величины тока тетрациклина от объема инжектируемой пробы (а) и от скорости потока-носителя (б)

Как видно из зависимости, приведенной на рис. 10 наибольшее значение тока регистрируется в потенциостатическом режиме при контролируемом потенциале, равном 1100 мВ. 
Гидродинамические и электрохимические условия, при которых регистрируются наилучшие характеристики ПИА-сигнала: 
Е= 1.10 В, V= 0.80 мл, u =20 мл/мин.

Рисунок 10 – Зависимость величины тока тетрациклина от потенциала ПИА-системы

Содержание тетрациклина в анализируемой пробе находили по градуировочной зависимости, для построения которой использовали растворы тетрациклина с точно известными концентрациями. Линейная зависимость величины ПИА-сигнала от концентрации тетрациклина лежит в диапазоне от 5мМ до 0.5 мкМ. Уравнение регрессии этой линейной зависимости ПИА-тока от концентрации тетрациклина и интервал зависимости приведен в табл. 2. 
Таблица 2 – Аналитические характеристики амперометрического детектирования этиленгликоля в условиях ПИА

Субстрат	Диапазон концентраций, М	Уравнение регрессии
lgI = а + b(-lgс)	R	
		а ∆ а	b ∆ b		
Тетрациклин	510-7-510-3	1.8980.001
	-0.304 0.002
	0.986	
	
Уравнение регрессии, рассчитанное по методу MNK имеет вид:: 
lg I= 1.89 +(– 0.304±0.002) ´ - lgc, R=0.986

Графическое изображение зависимости величины ПИА-сигнала от концентрации тетрациклина представлено на рис.11.

а

а

б

Рисунок 11 – Зависимость величины тока тетрациклина от его концентрации (а - в логарифмических единицах) и вид ПИА-грамм в диапазоне концентраций (5 ÷0.005) мМ

Правильность разработанной методики вольтамперометрического определения тетрациклина на Au-СУ была подтверждена с помощью метода «введено-найдено» (табл.3). Значение стандартного отклонения (Sr<5%), определяемое методом «введено-найдено», говорит о правильности используемой методики определения тетрациклина.
Таблица 3 – Метрологические характеристики вольтамперо-метрического способа определения тетрациклина на Au-СУ
 
Субстрат	Электрод 	Содержание субстрата, мкМ	Sr	
		Введено, мкМ	Найдено, (х ±Dх), мкМ		
Тетрациклин	Au-СУ	5.0
50.0
100	4.9± 0.2
51 ± 2
95 ± 2	0.04
0.03
0.01	

Измеренное значение величины тока регистрируемого ПИА-сигнала исследуемой пробы составляет 2.14 мкА. Для этого значения тока найденное по градуировочной зависимости содержание тетрациклина составляет 7.2 мкМ или 3,2 мг/л, что не превышает значение ПДК для тетрациклина в сточных водах его производства.
Определение тетрациклина в анализируемом объекте. 
Пробу анализируемой сточной воды с помощью инжектора вводили в проточную систему, которая после смешения с потоком-носителем, попадала в электрохимическую ячейку и на вольтамперометрическом анализаторе регистрировался ПИА-сигнал. Измеренная величина ПИА – сигнала составила 2.14 мкА, после введения этого значения в уравнение регрессии рассчитана концентрация этиленгликоля в пробе, равная 7.210-6М или 3.2мг/л, что превышает значение ПДК для тетрациклина в сточных водах его производства (ПДКТЦ=0.4 мг/л) (табл.4) [7]. 

Таблица 4 - Рассчитанные значения тетрациклина в исследуемом образце промывной воды

Объект исследования	Электрод	Аналит	I, мкА	C, мкМ	Найдено
(мг/л)	ПДК (мкг/л)	
Проба сточной воды	Au-СУ	Тетрациклин	2.14	7.2	3.24	0.4	
4. Статистическая обработка полученных результатов 
Статистическая обработка результатов для жесткости
Предмет статистической обработки результатов - случайные погрешности анализа [8]. Источники случайных погрешностей так многообразны, что их нельзя заранее предусмотреть и устранить. Эти погрешности приводят к тому, что результаты некоторых параллельных определений практически никогда не совпадают, они рассеиваются вокруг определенного значения. Степень рассеивания результатов характеризует воспроизводимость анализа. Большой разброс результатов параллельных определений свидетельствует о плохой воспроизводимости. Наоборот, чем меньше отдельные результаты различаются, тем выше воспроизводимость.
Для проведения статистической оценки эксперименты были последовательно введены с помощью инжектора в проточную систему пять проб одного образца химического стока коллектора промывных вод аппаратов синтеза. По полученным амперограммам рассчитаны значения тока и подставлены в градуировочную зависимость. По градуировочной зависимости найдены следующие значения содержания тетрациклина в пробе: (3.2; 3.2; 3.1; 3.3; 3,4) мг/л. Предварительно находили среднее значение для выборки полученных результатов для анализируемых проб 3.2; 3.2; 3.1; 3.3; 3,4.Среднее значение: 3.24 мг/л.
Стандартное отклонение единичного результата находили по формуле: ,  S=0.11
Относительное стандартное отклонение находили по формуле: 
,  Sr=0.035
Доверительный интервал находили по формуле: 
, tтабл=2,78, n=5,  Dx=0.14
	Результат: с = 3.24±0.14 мг/л

ВЫВОДЫ
1.	Разработан проточно-инжекционный анализ с использованием амперометрического детектирования тетрациклина на графитовом электроде с осадком золота.
2.	Выявлены оптимальные гидродинамические условия: скорость потока-носителя и объема инжектируемой пробы и  электрохимические условия: потенциал регистрации ПИА-сигнала с наилучшими характеристиками. Использование ПИА позволило автоматизировать процесс анализа, увеличило его производительность (до 60 проб/час) и экспрессность, что является необходимым для анализа сточных вод в промышленном масштабе.
3.	Проанализирована проба коллектора промывных вод аппаратуры, используемой для синтеза тетрациклина. Найденное значение концентрации тетрациклина в пробе, равное 3.24мг/л, что превышает предельно-допустимое значение для сточных вод фармацевтического производства. 
4.	 Оценена случайная погрешность определения тетрациклина в условиях потока, доверительный интервал найденных значений составляет 3.24± 0.14 мг/л. Правильность амперометрического способа детектирования тетрациклина в проточных условиях оценена методом "введено - найдено". Относительное стандартное отклонение не превышает 5% в рассматриваемом диапазоне концентраций.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ
1.	Современное состояние фармацевтической отрасли РФ и международный опыт. Материалы для сводной рабочей группы Комиссии при Президенте РФ по модернизации технологическому развитию экономики.//Strategy. 2014. c.30
2.	Ahmad Siddiqi. Patents and Pharmaceutical Drugs. The need for change / Siddiqi A. // Intellectual Property Law. Spring 2015, N.2. P. 4-13. 
3.	Anderson C.R., Heidi S. Rupp, Wen-Hsin Wu Complexities in tetracycline analysis—chemistry, matrix extraction,cleanup, and liquid chromatography /  C.R. Anderson, S. R. Heidi, Wu W.-H. // J. Chromatogr. A. – 2005. V.1075, № 1. P.23-32. 
4.	Sun X.-M. The Electrochemical sensor for the determination of tetracycline based on graphene /L-cysteine composite film / Sun X.-M., Meng-Xuan Xiong Zh. J., Chena W. // J.Electrochem. Soc. – 2017. . V.4, № 2. P.107-112.
5.	Шайдарова Л.Г. Химически модифицированные электроды на основе благородных металлов, полимерных пленок или их композитов в органической вольтамперометрии / Л.Г. Шайдарова, Г.К. Будников // Журн. аналит. химии. – 2008. – Т.63, № 10. – С.114.
6.	Шайдарова, Л.Г. Амперометрические сенсоры с каталитическими свойствами в органической вольтамперометрии / Проблемы аналитической химии. Т.14: Химические сенсоры / Л.Г. Шайдарова, Г.К. Будников под ред. Ю.Г.Власова – М.: Наука, 2011. – 203-284 с. 
7.	http://www.gosthelp.ru/text/GN21568998Predelnodopusti.html
8.	Чарыков А.К. Математическая обработка результатов химического анализа: Методы обнаружения и оценки ошибок, Химия, Ленинград, 1984, 168 с.