МАОУ “Лицей-инженерный центр”
МБУДО «Центр детского творчества «Танкодром»

Проточно-инжекционное определение антибиотика-стрептомицина в молоке

Хайрутдинова Эрика Римовна, 10 класс 
МАОУ “Лицей-инженерный центр”
Советского района г. Казани
Научный руководитель: к.х.н., п. д. о
Гедмина Анна Владимировна

Республика Татарстан- 2021 год

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ									3

1. Литературный обзор										6
1.1. Стрептомицин. Общая характеристика      						6
1.2. Побочное воздействие стрептомицина на организм человека			6
1.3. Пути попадания стрептомицина в молоко 						9
1.4. Методы определения стрептомицина в молоке					9
2. Экспериментальная часть								        10
2.1 Приборы и химические реагенты, необходимые для исследования	        11
2.2 Объекты исследования и приготовление растворов			        13
3. Обсуждение полученных результатов					                  14
4. Статистическая обработка полученных результатов 		        19
ВЫВОДЫ											        21
	СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ					        22

ВВЕДЕНИЕ
  Известно, что на продолжительность жизни человека оказывают влияние: медицинское обеспечение (10-15%), наследственное состояние здоровья (15-20%), вредные факторы окружающей среды (20-25%). Ключевой момент, который определяет то, что происходит с организмом –это качество питания (50-55%). Поэтому продуктам питания в наше время уделяется значительное внимание. Чем качественнее продукты, которые мы употребляем в пищу, тем лучше наше здоровье. Недобросовестный подход некоторых фермеров к подкормке и лечению животных приводит к загрязнению продуктов питания остатками различных лекарственных средств, включая антибиотики.
Среди огромного количества различных продуктов животного и растительного происхождения наиболее ценными в пищевом и биологическом отношении, являются молоко и молочные продукты. Стрептомицин на ряду с тетрациклином, и антибиотиками пенициллинового ряда наиболее часто присутствуют в молоке и молочной продукции. Используемый для лечения и профилактики заболеваний животных стрептомицин по пищевой цепи, попадая в организм человека, имеет свойство накапливаться и вызывать ототоксию, нефротоксию и поражения органов слуха.
Кроме того, бесконтрольное использование антибиотиков в лечении и профилактике заболеваний животных приводит к распространению и загрязнению окружающей среды антибиотикорезистентными бактериями, что является растущей и серьезной проблемой здравоохранения.  Антибиотикорезистентность не позволяет применять для лечения заболеваний человека определённые виды антибиотиков, к которым у бактерий вырабатывается устойчивость, терапия с помощью таких лекарственных средств не будет являться эффективной, что представляет огромную угрозу здоровью человека.
	Основной метод определения стрептомицина в молоке - это метод конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) с фотометрическим детектированием с помощью тест-систем RIDASCREEN®Streptomycin (производство фирмы R-Biopharm AG Германия) [1]. ИФА характеризуется высокой чувствительностью, но и высокой дороговизной анализа (поскольку в качестве реагентов используются дорогостоящие антитела и ферменты), в этом плане тест-метод является более дешевым, но полуколичественным. Поэтому поиск высокочувствительного, недорогого и экспрессного способа определения стрептомицина является актуальной задачей. По сравнению с ИФА, амперометрическое детектирование в проточно-инжекционных условиях отличается высокой чувствительностью, экспрессностью, производительностью определений, простотой выполнения эксперимента, недорогим оборудованием и, как следствие, низкой стоимостью анализа. В качестве гипотезы предполагается: в пробах молока присутствует стрептомицин из-за его применения в профилактике и лечении заболеваний животных.
Превышение значения стрептомицина в питьевом молоке по сравнению с санитарно-гигиеническими допустимыми значениями представляет экологический риск для здоровья человека. Обоснованность выбранной темы исследования продиктована ее актуальностью, степенью ее важности и востребованностью для решения проблемы, поставленной перед автором работы, и для снижения уровня экологического риска здоровью человека через снижение уровня распространения и развития антибиотикорезистентности у бактерий, являющихся возбудителями различных заболеваний человека. 
Целью исследования является разработка проточно-инжекционного способа определения стрептомицина в различных образцах молока.
В связи с обозначенной целью были поставлены следующие задачи:
1.	Разработать способ проточно-инжекционного анализа (ПИА) с амперометрическим детектированием стрептомицина на электроде с осадком никеля; 
2.	Оценить правильность используемой методики методом "введено - найдено", провести статистическую обработку;
3.	Определить содержание стрептомицина в образцах молока, оценить качество образцов молока на основании сравнения полученных данных со значениями предельно-допустимого уровня стрептомицина в молоке.

1. Литературный обзор
1.1. Стрептомицин. Общая характеристика.

Стрептомицин- исторически второй антибиотик (после пенициллина), он же первый из группы аминогликозидов, а также первый, оказавшийся эффективным против туберкулёза и чумы. Стрептомицин выделяют из лучистых грибов Streptomyces globisporus streptomycini или других родственных микроорганизмов.

Рисунок 1 - Структурная формула стрептомицина
Стрептомицин является антибиотиком широкого спектра действия, который выражается в активности стрептомицина по отношению как к грамположительным, так и грамотрицательным бактериям. Подавляет развитие стрепто- и стафилококков, возбудителей бруцеллеза и чумы. Бактериостатический и бактерицидный эффект такого антибиотика состоит в угнетении синтеза белка в рибосомах микробных клеток [3]. 
Особенностью стрептомицина является его способность в угнетении жизнедеятельности туберкулезной палочки, поэтому его используют в качестве противотуберкулезного лекарственного средства. 
1.2. Побочное воздействие антибиотика стрептомицина на организм человека

Стрептомицин дает ряд крайне негативных побочных эффектов и тяжелых осложнений. Неправильное применение стрептомицина приводит к различным осложнениям: нарушению равновесия, значительному ухудшению слуха (ортотоксический эффект), в особенности у маленьких детей, а также поражению почек (нефротоксический эффект). Использование стрептомицина во время беременности также приводит к нарушению слуха или полной глухоты у родившегося ребенка [4]. 
На сегодняшний день эта группа антибиотиков на фармакологическом рынке представлена еще следующими представителями, к которым относятся:
•	мономицин;
•	канамицин;
•	 гентамицин 
Перечисленные антибиотики так же, как и стрептомицин, относятся к антибиотикам широкого спектра действия. Все лекарственные средства аминогликозидной группы, обладают аналогичным со стрептомицином побочным действием, а именно способностью поражать органы слуха и почки (ортотоксический и нефротоксический эффекты).
Поэтому аминогликозиды редко применяются парентерально, но используются перорально, поскольку, плохо всасываясь из желудочно-кишечного тракта, создают высокие концентрации лекарственных веществ в ЖКТ, способствуя эффективному лечению инфекционных заболеваний кишечника [4].
Большой проблемой для здоровья всего человечества является повышение устойчивости к антибиотикам у бактерий, которые являются возбудителями различных заболеваний человека. 
Устойчивость к антибиотикам (антибиотикорезистентность) - это сохранение способности бактерий к размножению в присутствии концентраций антибиотиков, создаваемых при введении терапевтических доз лекарственных препаратов. Различают антибиотикорезистентность нескольких видов:  
•	Природная, которая определяется свойствами конкретного вида или рода микроорганизмов;
•	Приобретённая, которая возникает в результате потери чувствительности бактерий к антибиотику из - за генетические мутации. 
Устойчивость к антибиотикам не позволяет применять конкретные лекарственные средства для лечения заболеваний человека ввиду нечувствительности бактерий - возбудителей этих самых заболеваний. Антибиотикорезистентность у микроорганизмов может развиться в результате:
•	Мутаций в геноме;
•	Изменения проницаемости мембраны антибиотика;
•	Изменения "мишени" - конкретной структуры клетки, на который антибиотик должен оказывать воздействие;
•	Нарушения специфического транспорта антибиотика в бактериальную клетку (именно этот биологический механизм является причиной возникновения устойчивости конкретно к стрептомицину);
•	Превращения активной формы антибиотика в неактивную при помощи ферментов.
Использование стрептомицина для профилактики и лечения заболеваний коров в неконтролируемых дозировках ведет к распространению антибиотикорезистентности. Попадая в организм животного, антибиотик накапливается, и в результате действия определенных биохимических механизмов мы получаем бактерии - возбудители, абсолютно нечувствительные к стрептомицину. С экскрементами коров эти микроорганизмы попадают в окружающую среду, а с молоком - и в организм человека, что представляет огромную угрозу для его здоровья, поскольку возникает проблема невозможности применения стрептомицина для лечения определённых заболеваний.

1.3. Пути попадания стрептомицина в молоко
Как стрептомицин попадает в молоко? Животные, так же, как и люди, болеют, и их приходится лечить, в том числе антибиотиками [3]. Коровы дают молоко круглогодично, что противоестественно для их биологической природы, и это вызывает воспалительные процессы в их организме. Из-за скученности животных, тесноты, часто возникают различные инфекции, которые быстро передаются от одного животного к другому. Также с применением стрептомицина проводится профилактика заболеваний животных. Поэтому одним из источников антибиотиков в молоке является лечение и профилактика заболеваний коров. По пищевой цепи стрептомицин попадает в организм человека, имеет свойство накапливаться и негативно сказываться на здоровье человека, приводя к перечисленным выше заболеваниям и патологиям. 

1.4. Методы определения стрептомицина в молоке

Основной метод определения стрептомицина в молоке - это метод конкурентного иммуноферментного анализа с фотометрическим детектированием [1]. Этот метод основан на взаимодействии антител с стрептомицином. Анализ с помощью этого метода выполняется следующим образом: в лунки планшета дозируются исследуемые (стандартные) образцы и раствор, содержащий антитела к стрептомицину. При инкубации планшета в течение определенного времени молекулы стрептомицина, содержащиеся в пробе или в стандартном растворе, и молекулы стрептомицина на поверхности планшета, конкурируя между собой, связываются антителами к стрептомицину. Иммуноферментный метод характеризуется высокой чувствительностью, но и высокой дороговизной анализа, в этом плане тест -метод является более дешевым, но полуколичественным, и точное содержание стрептомицина в исследуемом объекте не определится. Пример ИФА комплекса, используемого для определения стрептомицина представлен на рис. 2.

Рисунок 2 ИФА комплекса, используемого для определения стрептомицина в молоке.

Поэтому поиск высокочувствительного, недорогого и экспрессного способа определения стрептомицина является важной задачей.
2. Экспериментальная часть
Как следует из литературного обзора, определение содержания антибиотика-стрептомицина в питьевом молоке является актуальной задачей, поскольку превышение значения стрептомицина в питьевом молоке по сравнению с санитарно-гигиеническими допустимыми значениями представляет экологический риск для здоровья человека.
Этапы работы:
•	Выбор условий иммобилизации осадка никеля на поверхности электрода из стеклоуглерода (СУ) с целью регистрации максимального электрокаталитического эффекта окисления стрептомицина; 
•	Выбор оптимальных условий амперометрического детектирования стрептомицина в проточно-инжекционных условиях: определение гидродинамических и электрохимических параметров проточной системы с использованием СУ электрода с осадком никеля, оценка производительности проточно-инжекционного анализа; 
•	Разработка способа амперометрического детектирования стрептомицина в условиях проточно-инжекционного анализа, установление линейной зависимости ПИА-сигнала от концентрации исследуемого антибиотика; 
•	Проведение пробоподготовки образцов питьевого коровьего молока и определение содержания стрептомицина в образцах молока с помощью разработанного способа для определения в нем содержания стрептомицина; 
•	Соотнесение содержания стрептомицина в исследуемых объектах со значениями предельно допустимого уровня стрептомицина в молоке;
•	Проведение статистической обработки, оценка правильности используемой методики методом «введено-найдено».
2.1 Оборудование, используемое для проведения исследования

Для иммобилизации осадка никеля на поверхности электрода из СУ, то есть для получения сенсорной части модифицированного электрода, и в качестве детектора амперометрического детектирования в условиях ПИА использовали прибор «Экотест-ВА» фирмы «Эконикс-Эксперт» (рис.3).

Схема оборудования:
1-Прибор «Экотест-ВА»
2- Магнитная мешалка
3-Электрохимическая ячейка:
*	Стеклоуглеродный электрод (СУ) с осадком Ni
*	Платиновый контакт - противоэлектрод
*	Хлоридсеребряный электрод

Рисунок 3 – Схема оборудования для вольтамперометрических исследований.
Для иммобилизации осадка никеля на поверхности электрода из СУ использовали потенциостатический электролиз при контролируемом потенциале равном -600мВ в течение 5 минут из 0.1М раствора HCl, содержащего 1мМ NiCl2. Для формирования на поверхности осадка никеля оксоформ, являющихся электрокаталитическими активными при окислении стрептомицина перед использованием электрод с предварительно осажденным никелем помещали в раствор 0.1M NaOH и проводили сканирование потенциала в области от -0.0 В до +0.90 В в течение 20 циклов со скоростью наложения потенциалов 100мВ/с. 

1 - перистальтический насос 
2 - инжектор 
3 – смеситель
4 - электрохимическая ячейка 
5 и 6 – вольтамперометрический анализатор и компьютер.

Амперометрическое детектирование в условиях ПИВ осуществляли с помощью проточной системы, схема которой представлена на рис.4.

Рисунок 4 – Схема проточно-инжекционной системы

Пробоподготовку реального образца молока проводили, используя центрифугу (рис.5). Пробоподготовка заключалась в центрифугировании анализируемой пробы, объемом 2 мл в течении 10 минут при 4000 оборотов в минуту и последующем фильтровании образца.

Схема оборудования:
1-Центрифуга СМ-6М
2- Эпиндорфы с образцами

1

2

Рисунок 4 – Схема оборудования для проведения пробоподготовки образца молока для анализа на содержание стрептомицина.

2.2 Объекты исследования и приготовление растворов
Объектом исследования являлись образцы пастеризованного («Домик в деревне» 3.2% жирности) и сырого молока. Предметом исследования являлось определение содержания в пробах стрептомицина с использованием проточно-инжекционного анализа с амперометрическим детектированием, позволяющего значительно повысить производительность проводимого анализа, в том числе в промышленном масштабе. 
Для построения градуировочной зависимости стандартные концентрации стрептомицина получали последовательным разбавлением 5мМраствора антибиотика 0.1 М раствором NaOH с рН 13. В качестве потока-носителя проточной системы использовали 0.01 М раствор NaOH с рН 12. Структурные формулы исследуемых соединений представлены в таблице 1.
Таблица 1 – Структурная формула предмета исследования 

Название
органического соединения	Структурная формула
органического соединения	
Стрептомицин

Mr 581,58 г×моль-1

3. Обсуждение полученных результатов
Предварительно было исследовано электрохимическое поведение стрептомицина на СУ с осадком никеля в присутствии и отсутствии 5мМ стрептомицина (рис.5). Концентрация стрептомицина в исследуемом растворе составляет 5мМ. Как видно из рис.5, в присутствии стрептомицина ток окисления оксоформ никеля (II) многократно увеличивается по сравнению с током окисления модификатора в отсутствии стрептомицина, однако его определение на таком электроде не является чувствительным, поскольку значение тока окисления стрептомицина невелико. 
 
Рисунок 5 - Циклические вольтамперограммы, полученные на СУ и Ni-СУ в присутствии и отсутствии стрептомицина

Таким образом, использование вольтамперометрии с электрокаталитическим откликом позволяет значительно повысить величину тока окисления аналита [6,7,8] по схеме:

Ni(II)(OH)2     Ni(III)O(OH) + ē + H+

Ni(III)O(OH) +S + OH-   Ni(II)(OH)2 +Р

       	где S - стрептомицин, 
а Р - продукт окисления стрептомицина

В качестве катализатора для окисления стрептомицина выступают оксоформы никеля (III) [8], которые окисляют стрептомицин до продукта окисления и регенирируются оксоформы никеля (II). Определены условия иммобилизации никеля при которых регистрируется наибольшее значение аналитического сигнала (рис.6).  

•	       от количества циклов
(б)

•	     от времени осаждения 
(а)

Рисунок 6 - Зависимость тока пика окисления стрептомицина от времени электроосаждения никеля (а) и от продолжительности циклирования осадка никеля в 0.1М раствором NaOH с рН 13 (б ).

Регистрируемый в присутствии стрептомицина каталитический отклик был использован для его детектирования в условиях проточно-инжекционного анализа, который позволяет автоматизировать процесс, увеличить его производительность и экспрессность, что является необходимым для анализа сточных вод в промышленном масштабе. Регистрация ПИА-граммы происходит в амперометрическом режиме при контролируемом потенциале, равном 600 мВ. На рис.7 приведена проточно-инжекционная амперограмма для этиленгликоля.

Рисунок 7 – Проточно-инжекционная амперограмма стрептомицина
Как видно из приведенной проточно-инжекционной амперограммы, производительность проводимого анализа составляет 60 проб в час. На величину аналитического сигнала в условиях потока влияют гидродинамические параметры проточной системы, а именно скорость потока-носителя и объема инжектируемой в поток пробы. На рис. 8 представлены зависимости тока стрептомицина от объема пробы и скорости потока-носителя (u).
		
Рисунок 8 – Зависимость ПИА-сигнала от объема инжектируемой пробы стрептомицина (V) (а) и скорости потока-носителя (б)
Величина ПИА-сигнала также зависит от величины контролируемого потенциала проточной системы (Е) (рис.9)

Рисунок 9 – Зависимость ПИА-сигнала стрептомицина от потенциала

Таким образом, были выбраны оптимальные условия регистрации ПИА-сигнала:
Е= 0.60 В, V= 0.70 мл, u =20 мл/мин
Концентрацию стрептомицина в рассматриваемых образцах молока находили по градуировочному графику (рис.10), линейной зависимости величин ПИА-сигнала от точно известной концентрации стрептомицина в логарифмических координатах. Уравнение регрессии этой линейной зависимости ПИА-тока от концентрации этиленгликоля и интервал зависимости приведен в табл. 2. 

Таблица 2 – Аналитические характеристики амперометрического детектирования этиленгликоля в условиях ПИА

Субстрат	Диапазон концентраций, М	Уравнение регрессии
lgI = а + b (-lgс)	R	
		а ∆ а	b ∆ b		
Стрептомицин	1107-510-3	1.350.01	(-0.29 0.02)	0.993	

На рис.10 показана градуировочная логарифмическая зависимость тока от концентрации аналита.

Рисунок 10 - Логарифмическая зависимость тока пика окисления стрептомицина от его концентрации.
Правильность разработанной методики вольтамперометрического определения стрептомицина на Ni-СУ была подтверждена с помощью метода «введено-найдено» (табл.2)
Таблица 2
Метрологические характеристики вольтамперометрического способа определения стрептомицина на Ni-СУ. 

Субстрат	Электрод 	Содержание субстрата, мкМ	Sr	
		Введено, мкМ	Найдено, (х ±Dх), мкМ		
Поток -носитель 0.01 М раствор NaOH  (рН 12.0)	
Стрептомицин	Ni-СУ	5.0
10.0
100	5.1± 0.2
10.2 ± 0.3
99 ± 3	0.04
0.03
0.03	
Значение стандартного отклонения (Sr<5%), определяемое методом «введено-найдено», говорит о правильности используемой методики проточно-инжекционного определения стрептомицина.
Определение стрептомицина в реальном объекте
Методика определения была апробирована на реальном объекте (после предварительной пробоподготовки). В качестве реального объекта рассматривалось сырое и пастеризованное молоко (марки «Домик в деревне» жирности 3,2%). Молоко подвергалось предварительной пробоподготовке, которая заключалась в помещении пробы молока в эпиндорфную емкость, объемом 4 мл, в которую добавляли 2 мл пробы исследуемого образца молока и 2 мл 0.1 М серной кислоты и центрифугировалось в течение 15 минут при 4000 оборотов в минуту, после фильтрования к процентрифугированной жидкости, после фильтрования осажденной белковой части добавлялся 0.1 М раствор NaOH и регистрировалась проточно-инжекционная амперограмма исследуемого образца антибиотика Измеренные значения величин токов пиков окисления стрептомицина в исследуемых объектах были введены в уравнение градуировочной зависимости, по которой была рассчитана концентрация аналита в пробе сырого и пастеризованного молока. Молярная концентрация была пересчитана на мкг/л и сопоставлена с допустимыми значениями санитарно-гигиенических норм питьевого молока (табл. 3). Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, принятые в Российской Федерации, в соответствии с СанПиНом 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" и №88 - ФЗ в редакции Федерального закона от 22. 07. 2010 №163 - ФЗ "Технический регламент на молоко и молочную продукцию", ограничивают уровень стрептомицина в молоке величиной 0,01 ед/г (100 мкг/л) [2].

Таблица 3-Рассчитанные значения стрептомицина в реальных молочных объектах

Объект исследования	Электрод	Аналит	I, мкА	C, мкМ	Найдено
(мкг/л)	ПДК (мкг/л)	
Сырое коровье молоко 	Ni-СУ	СтрЦ	0.25	0.19	111.65	100	
Пастеризованное молоко «Домик в деревне»			0.21  	0.102	59.67		

	Количество стрептомицина в сыром молоке превышает допустимое санитарно - гигиеническими нормами значения содержания стрептомицина в питьевом молоке (рис. 11)

Рисунок 11- Диаграмма сопоставления полученных значений содержания стрептомицина в образцах молока с предельно-допустимыми значениями

4. Статистическая обработка полученных результатов 
Статистическая обработка результатов для жесткости
Предмет статистической обработки результатов — случайные погрешности анализа [5]. Источники случайных погрешностей многообразны и их нельзя заранее предусмотреть и устранить. Эти погрешности приводят к тому, что результаты некоторых параллельных определений практически никогда не совпадают, они рассеиваются вокруг определенного значения. Степень рассеивания результатов характеризует воспроизводимость анализа и математически выражается величиной относительного стандартного отклонения (Sr). Большой разброс результатов параллельных определений свидетельствует о плохой воспроизводимости (если Sr больше 7 %). Наоборот, чем меньше отдельные результаты различаются, тем выше воспроизводимость.
Для проведения статистической оценки эксперименты были взяты шесть аликвот одного образца сырого молока, которые были помещены в эпиндорфы для центрифугирования. После прохождения процедуры пробоподготовки , исследуемые аликвоты были перенесены в инжекционный шприц и проба внесена в инжектор, после чего проведена регистрации ПИА-граммы. По полученным ПИА-граммам рассчитаны значения тока и подставлены в градуировочную зависимость. По градуировочной зависимости найдены следующие значения содержания стрептомицина в пробе сырого молока: (0.19; 0.19; 0.21; 0.18; 0.19; 0.20) мкМ/л. Среднее значение: 0.19 моль/л.
Стандартное отклонение единичного результата находили по формуле: ,  S=0.01
Относительное стандартное отклонение находили по формуле: 
,  Sr=0.05
Доверительный интервал находили по формуле: 
, tтабл=2,57, n=6,  Dx=0.01
Результат: с = 0.19±0.01 моль/л

ВЫВОДЫ

1.	Разработан способ проточно-инжекционного амперометрического детектирования антибиотика-стрептомицина на графитовом электроде с осадком никеля. Определены условия иммобилизации на графитовую поверхность осадка никеля.
2.	Выявлены оптимальные гидродинамические условия проточно-инжекционного анализа: скорость потока-носителя и объема инжектируемой пробы и электрохимические условия: потенциал регистрации ПИА-сигнала с наилучшими характеристиками. Использование ПИА позволило автоматизировать процесс анализа, увеличило его производительность (до 60 проб/час) и экспрессность, что является необходимым для анализа в промышленном масштабе.
3.	Проанализированы пробы пастеризованного молока «Домик в деревне» и сырого молока на содержания в них стрептомицина. Найденное значение концентрации стрептомицина в пробе молока «Домик в деревне, равное 59.7 мкг/л, не превышает предельно-допустимое значение, в то время как в пробе сырого молока найдено превышение стрептомицина, равное 111.7 мкг/л, относительно предельно-допустимого значения 100.0мкг/л.
4.	 Оценена случайная погрешность определения стрептомицина в образце сырого молока в условиях потока, доверительный интервал найденных значений составляет 0.19±0.01 мгк/л. Правильность амперометрического способа детектирования стрептомицина в проточных условиях оценена методом "введено – найдено» в модельном растворе. Относительное стандартное отклонение не превышает 5% в рассматриваемом диапазоне концентрации.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ
1.	Галкин А.В. Теория и практика иммуноферментного анализа. //Био. - Июнь - 2003 – С. 33.
2.	ГОСТ Р53774-2010.Молоко и молочные продукты.
3.	Навашин С.М., Фомина И.П. Справочник по антибиотикам. М.: Медицина - 1974, 416 с. 
4.	Справочник Видаль Лекарственные препараты в России. М.: ЮБМ Медика Рус,2014. – 1536 с.
5.	Чарыков А.К. Математическая обработка результатов химического анализа: Методы обнаружения и оценки ошибок, Химия, Ленинград- 1984, 168 с.
6.	Шайдарова Л.Г. Химически модифицированные электроды на основе благородных металлов, полимерных пленок или их композитов в органической вольтамперометрии / Л.Г. Шайдарова, Г.К. Будников // Журн. аналит. химии. – 2008. – Т.63, № 10. – С.114.
7.	Шайдарова Л.Г. Амперометрические сенсоры с каталитическими свойствами в органической вольтамперометрии / Проблемы аналитической химии. Т.14: Химические сенсоры / Л.Г. Шайдарова, Г.К. Будников под ред. Ю.Г. Власова – М.: Наука, 2011. –С. 203-284 
8.	Riber, J. Electrochemical study of antioxidants at a polypyrrole electrode modified by a nickel phthalocyanine complex. Application to their HPLC separation and to their FIA system detections / J. Riber, C. l. Fuente, M.D Vazquez, M.L Tascón, P. S. Batanero. – 2000. – V. 52, N 2. – P. 241.